TLC的显色方法

   上海药物所徐任生先生的[中草药有效成分提取与分离]介绍得很详细，美国药典附录也有收载。常用的有碘、硫酸、高锰酸钾、香兰素、磷钼酸铵、茚三酮等，希望能对您有帮助。

   茚三酮适合含氮的（仲、伯）氮化合物。碘能使大多数化合物显色，尤其是含氮化合物（有些酰胺是不灵敏的）。浓硫酸或者乙醇-硫酸靠炭化发黑显色，电炉加热也是此原理。
     高锰酸钾和磷钼酸铵是无机物溶液显色剂。以上是通用显色剂。有苯环，芳环，多共轭键对紫外有强吸收，可用紫外光。
     这些都不灵时，要找专用显色剂。

   一般不用“磷钼酸铵“，它在水或醇中都不溶。
常用的是：
（1）磷钼酸显色剂：磷钼酸 5%-10% 乙醇溶液，淡黄色，久置变为浅绿色，不影响使用。浸板或喷板，加热，浅黄色背景，还原性物质显蓝绿色斑点，如果斑点太浓，可能显深黄色。
（2）CAM显色剂:钼酸铵9.6g,硫酸铈0.4g,10%硫酸水溶液 200ml,混匀，极淡的黄色溶液，棕色瓶密闭保存，喷板，加热，白色背景，还原性物质显深蓝色斑点。

显色的方法各种各样，主要根据化合物的性质选择不同的显色方法。许多关于植物有效成分提取与分离的书上都有介绍，通用的有碘、硫酸乙醇、香草醛－硫酸等，当然还有许多专用的显色剂，如：溴甲酚绿使有机酸显黄色，三氯化铁使酚羟基显蓝色，碘化铋钾使生物碱显桔黄色.....

显色剂                      化合物
苯胺邻苯二甲酸酯     碳水化合物，糖类
溴甲酚绿                  羧酸
二甲氨基苯甲醛         氨基酸，多肽
磷钼酸                      苯酚类
若丹明                     类酯类

然不是所有的化合物都有荧光，必须分子中有共轭结构才可以。我也用UV，但一般只当一种辅助的检测方法。

化学试剂喷雾显色
2.浓硫酸加热炭化显色
3.从CA物质索引中找该物质的TLC方法
4.查各种文献寻找该物质的TLC方法及显色方法

①硫酸常用的有四种溶液：硫酸-水(1：1)溶液；硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液；1.5mol／L硫酸溶液与0.5-1.5mol／L硫酸铵溶液，喷后110oC烤15min，不同有机化合物显不同颜色。
②0.5％碘的氯仿溶液 对很多化合物显黄棕色。
③中性0.05％高锰酸钾溶液 易还原性化合物在淡红背景上显黄色。
④碱性高锰酸钾试剂 还原性化合物在淡红色背景上显黄色。
溶液I：1％高锰酸钾溶液；
溶液Ⅱ：5％碳酸钠溶液；
溶液I和溶液Ⅱ等量混合应用。
  ⑤酸性高锰酸钾试剂 喷1.6％高锰酸钾浓硫酸溶液(溶解时注意防止爆炸)，喷后薄层于180oC加热15～20min。
⑥酸性重铬酸钾试剂 喷5％重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150oC烤薄层。
⑦5％磷钼酸乙醇溶液 喷后120oC烘烤，还原性化合物显蓝色，再用氨气薰，则背景变为无色。
  ⑧铁氰化钾-三氯化铁试剂 还原性物质显蓝色，再喷2mol／L盐酸溶液，则蓝色加深。
  溶液I：1％铁氰化钾溶液；
  溶液Ⅱ：2％三氯化铁溶液；
  临用前将溶液I和溶液Ⅱ等量混合。
2．专属性显色剂
  由于化合物种类繁多，因此专属性显色剂也是很多的，现将在各类化合物中最常用的显色剂列举如下：
  (1)烃类
  ①硝酸银／过氧化氢
  检出物：卤代烃类。
  溶液：硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀释至200ml，再加30％过氧化氢1滴。
  方法：喷后置未过滤的紫外光下照射；  
  结果：斑点呈暗黑色。
  ②荧光素／溴
  检出物：不饱和烃。
  溶液：I．荧光素0.1g溶于乙醇lOOml；
      Ⅱ．5％溴的四氯化碳溶液。
  方法：先喷(I)，然后置含溴蒸气容器内，荧光素转变为四溴荧光素(曙红)，荧光消失，不饱和烃斑点由于溴的加成，阻止生成曙红而保留荧光，多数不饱和烃在粉红色背景上呈黄色。
  ③四氯邻苯二甲酸酐
检出物：芳香烃。
  溶液：2％四氯邻苯二甲酸酐的丙酮与氯代苯(10：1)的溶液。
  方法：喷后置紫外光下观察。
  ④甲醛／硫酸
  检出物：多环芳烃。
  溶液：37％甲醛溶液O.2ml溶于浓硫酸l0ml。
  (2)醇类
  ①3，5一二硝基苯酰氯
  检出物：醇类。

溶液：I．2％本品甲苯溶液；
      Ⅱ．0.5％氢氧化钠溶液；
      Ⅲ．O.002％罗丹明溶液。
  方法：先喷(I)，在空气中干燥过夜，用蒸气薰2min，将纸或薄层通过试液(Ⅱ)30s，喷水洗，趁湿通过(Ⅲ)15s，空气干燥，紫外灯下观察。
②硝酸铈铵
检出物：醇类。
溶液：I．1％硝酸铈铵的0.2mol／L硝酸溶液；
    Ⅱ．N,N-二甲基-对苯二胺盐酸盐1.5g溶于甲醇、水与乙酸(128m1+25m1+1．5m1)混合液中，用前将(I)与(Ⅱ)等量混合。喷板后于105oC加热5min。
③香草醛／硫酸
检出物：高级醇、酚、甾类及精油。
溶液：香草醛1g溶于硫酸lOOml。
方法：喷后于120oC加热至呈色最深。
④二苯基苦基偕肼 ’
检出物：醇类、萜烯、羰基、酯与醚类。
溶液：本品15mg溶于氯仿25ml中。
方法：喷后于110oC加热5～lOmin。
结果：紫色背景呈黄色斑点。
(3)醛酮类
①品红／亚硫酸
检出物：醛基化合物。
溶液：I．0.01%品红溶液，通入二氧化硫直至无色；
    Ⅱ．0.05mol／L氯化汞溶液；
    Ⅲ．O.05mol／L硫酸溶液。
  方法：将I、Ⅱ、Ⅲ以1：1：10混合，用水稀释至l00ml。
②邻联茴香胺  
检出物：醛类、酮类。
溶液：本品乙酸饱和溶液。
③2，4-二硝基苯肼
检出物：醛基、酮基及酮糖。
溶液：I．0.4％本品的2mol／L盐酸溶液；
Ⅱ．本品O.1g溶于乙醇l00ml中，加浓盐酸lml。
方法：喷溶液I或Ⅱ后，立即喷铁氰化钾的2mol／L盐酸溶液。
结果：饱和酮立即呈蓝色；饱和醛反应慢，呈橄榄绿色；不饱和羰基化合物不显色。
④绕丹宁
检出物：类胡萝卜素醛类。
溶液：I．1%～5%绕丹宁乙醇溶液；
    Ⅱ．25%氢氧化铵或27%氢氧化钠溶液。
方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ，干燥。
(4)有机酸类
①溴甲酚绿
检出物：有机酸类。
溶液：溴甲酚绿0.1g溶于乙醇500ml和0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml。

方法：浸板。
结果：蓝色背景产生黄色斑点。
②高锰酸钾／硫酸
检出物：脂肪酸衍生物。
溶液：见通用显色剂酸性高锰酸钾。
③过氧化氢
检出物：芳香酸。
溶液：0.3%过氧化氢溶液。
方法：喷后置紫外光(365nm)下观察。
结果：呈强蓝色荧光。
④2，6-二氯苯酚-靛酚钠
检出物：有机酸与酮酸。
溶液：0.1%本品的乙醇溶液。
方法：喷后微温。
结果：蓝色背景呈红色。
(5)酚类
①Emerson 试剂(4-氨基安替比林／铁氰化钾(Ⅲ))
检出物：酚类、芳香胺类及挥发油。
溶液：I．4-氨基安替比林1g溶于乙醇100ml；
    Ⅱ．铁氰化钾(Ⅲ)4g溶于水50ml，用乙醇稀释至100ml。
方法：先喷溶液I，在热空气中干燥5min，再喷溶液Ⅱ，再于热空气中干燥5min，然后将板置含有氨蒸气(25％氨溶液)的密闭容器中。
结果：斑点呈橙-淡红色。挥发油在亮黄色背景下呈红色斑点。
②Boute 反应
检出物：酚类、氯、溴、烷基代酚。
方法：将薄层置有NO2蒸气(含浓硝酸)的容器中3～10min，再用NH2蒸气(浓氨液)处理。
③氯醌(四氯代对苯醌)
检出物：酚类。
溶液：1％本品的甲苯溶液。
④DDQ(二氯二氰基苯醌)试剂
检出物：酚类。
溶液：2％本品的甲苯溶液。
⑤TCNE (四氰基乙烯)试剂
检出物：酚类、芳香碳氢化物、杂环类、芳香胺类。
溶液：0.5%～1%本品的甲苯溶液。
⑥Gibb’s(2，6-二溴苯醌氯亚胺)试剂
检出物：酚类。
溶液：2%本品的甲醇溶液。
⑦氯化铁
检出物：酚类、羟酰胺酸。
溶液：1%～5%氯化铁的0.5mol／L盐酸溶液。
结果：酚类呈蓝色、羟酰胺酸呈红色。
(6)含氮化合物
①FCNP(硝普钠／铁氰化物)试剂